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Leagene 核酸提取輔助試劑(25:24替代試劑,pH>7.8),又稱核酸抽提溶液或DNA抽提溶液(25:24),由Tris飽和酚和氯仿替代物組成,不含異戊醇,是傳統(tǒng)苯酚-氯仿溶液25:24的優(yōu)秀替代品。該抽提液pH高于7.8,可以保證分相后DNA存在于上層水相中,用于樣品中基因組DNA的提取。
在酚-氯仿中加入少量異戊醇,可以減少抽提過(guò)程中泡沫的產(chǎn)生,同時(shí)異戊醇有助于分相,使離心后的上層水相,中層變性蛋白相以及下層有機(jī)溶劑相維持穩(wěn)定。由于本產(chǎn)品不含異戊醇,根據(jù)需要自行添加,一般為核酸提取輔助試劑(1:1替代試劑):異戊醇=49:1或99:1。
DNA抽提溶液提取DNA的原理是通過(guò)DNA裂解緩沖液裂解樣品后釋放出DNA,再通過(guò)DNA抽提溶液(25:24:1)抽提,去除樣品中蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì),再加入乙醇或異丙醇等沉淀核酸即可使DNA分離出來(lái)。該抽提溶液可以使蛋白質(zhì)變性,同時(shí)利用RNA、DNA、蛋白質(zhì)三者的性質(zhì)差別來(lái)分離DNA。抽提離心后的上層為含DNA的水相,中間為變性蛋白相,下層為有機(jī)溶劑相。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。