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Leagene 核酸提取輔助試劑(25:24替代試劑,pH<5.0),又稱核酸抽提溶液或RNA抽提溶液(25:24),由水飽和酚和氯仿替代物按25:24的體積比混合而成的,不含異戊醇,是傳統(tǒng)苯酚-氯仿溶液25:24的優(yōu)秀替代品。該抽提液pH小于5.0,可以保證分相后RNA存在于上層水相中,主要用于樣品中RNA的提取,不能用于DNA的提取。
酸性酚可使蛋白質(zhì)變性,同時(shí)抑制了RNase的降解作用。氯仿抽提可加速有機(jī)相與液相分層,去除核酸溶液中的跡量酚。經(jīng)常在酚-氯仿溶液中加入少量異戊醇,可以減少抽提過程中泡沫的產(chǎn)生。由于本產(chǎn)品不含異戊醇,根據(jù)需要自行添加,一般為核酸提取輔助試劑(1:1替代試劑):異戊醇=49:1或99:1。
其提取RNA的原理是樣品通過RNA裂解緩沖液裂解后釋放出RNA,再通過RNA抽提溶液(25:24:1)抽提,去除樣品中蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì),再加入乙醇或異丙醇等沉淀核酸即可使RNA分離出來。該抽提溶液可以使蛋白質(zhì)變性,同時(shí)利用RNA、DNA、蛋白質(zhì)三者的性質(zhì)差別來分離RNA。使用酚:氯仿:異戊醇抽提離心后的上層為含RNA的水相、中間為變性蛋白與DNA,下層為有機(jī)溶劑相。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。