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蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色簡稱HE染色,是病理學常規(guī)制片中最基本的染色方法,應用極其廣泛,蘇木精是從原產(chǎn)于中南美州的洋蘇木中提取出來的淺黃褐色的結晶,是一種堿性染色劑,它在被氧化后生成蘇木素,同媒染劑(常用的是三價的鋁或鹽鐵)一起使用,能夠使細胞核染色。在病理診斷、教學和科研工作中,常用HE染色對正常組織和病變組織進行形態(tài)結構觀察,可確定或鑒別病變組織、細胞中出現(xiàn)的某些異常物質(zhì)與特殊成分,而需要采用的特殊染色方法、酶組織化學方法、免疫組織化學方法等也均是在觀察HE染色組織切片的基礎上進行的,在HE染色的組織切片中細胞核呈藍色,細胞漿呈紅色,二者形成鮮明的對比,易于觀察分析。
Leagene蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒(含分化液和返藍液)中蘇木素染色液采用Leagene自主研發(fā)的配方,由進口的高純度蘇木精、氧化劑等組成,不含氧化汞、甲醇等有害物質(zhì),對細胞核染色效果好,其特點是不易產(chǎn)生沉淀和金屬膜;應用范圍廣,可以用于人、動物、畜牧、水產(chǎn)等領域,可以用于組織石蠟切片、冰凍切片和組織細胞的染色等。蘇木素染色液和伊紅染色液均可以重復使用。該產(chǎn)品僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
染色原理:
1、細胞核染色原理:蘇木素為堿性天然染料,可使細胞核著色,細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA,在DNA雙螺旋結構中兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。
2、細胞漿染色原理:伊紅是一種化學合成的酸性染料,在一定條件下可使細胞漿著色,細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物,細胞漿的染色與染液的pH值密切相關,當染色液pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(4.7~5.0)以下時,胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離,則細胞漿帶正電荷,就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子,與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽離子結合,使細胞漿著色,呈現(xiàn)紅色。
3、分化作用:染色后,用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去,這個過程稱為分化作用,所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用0.5-1%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木素的醌型結構,使組織與色素分離而退色。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后,必須用鹽酸乙醇分化,使細胞核過多結合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去,再進行伊紅染色,才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。
4、返藍作用:分化之后,蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),呈紅色;在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài),呈藍色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色,立即用水除去組織切片上的酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現(xiàn)藍色,這個過程稱為返藍作用或藍化作用,另外用自來水(尤其是溫水)浸洗也可使細胞核返藍,但所需時間較長。