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服務(wù)介紹：

羥自由基清除率檢測(cè)試劑盒(Fenton微板法)又稱羥自由基清除能力檢測(cè)試劑盒或羥自由基檢測(cè)試劑盒，其檢測(cè)原理是H₂O₂/Fe²⁺ 通過(guò)Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，并將Fe²⁺氧化為Fe³⁺，導(dǎo)致紅色的鄰二氮菲-Fe²⁺氧化為無(wú)色的鄰二氮菲-Fe³⁺，使鄰二氮菲-Fe²⁺在536nm處的最大吸收峰消失，可通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定530~540nm處吸光度的變化，據(jù)此可計(jì)算出羥自由基的含量變化，即可計(jì)算出樣品的羥自由基清除率或清除能力，主要用于植物組織、血清、血漿等樣本。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取，按1~1.5g樣品：4.5ml 蒸餾水的比例勻漿或研磨，室溫靜置4h，離心取上清

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可用于該試劑盒的測(cè)定

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的羥自由基，可用蒸餾水進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、·OH加樣：按照下表設(shè)置空白管、未損傷管、損傷管、對(duì)照管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，然后，置各管于37℃水浴鍋保溫1h；如果樣品中的羥自由基(·OH)濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。

·OH測(cè)定：取96孔板，將各管溶液依次吸取250ul加至96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測(cè)530~540nm處各孔吸光度值，依次記為A₀、A₁、A₂、A₃`、A₃。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

全自動(dòng)生化儀檢測(cè)后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運(yùn)輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)

準(zhǔn)確稱取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定。

2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)

全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜（GLU檢測(cè)請(qǐng)勿全血樣本放置過(guò)夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。

3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)

可用肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。

4、細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS沖洗2次后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來(lái)，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

細(xì)胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！